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怎樣進行蛋白質保存??你了解多少?
作者:固拓多肽合成公司    發布于:2021年08月09日
摘要:一、切記蛋白質的儲存標準 超低溫、分裝、濃縮、冷凍/速融、添加劑 二、儲存方法你了解多少 蛋白質的的儲存方法的挑選徹底在于蛋白質的可靠性以及儲存后何時再次使用你的蛋白質。

一、切記蛋白質的儲存標準

超低溫、分裝、濃縮、冷凍/速融、添加劑

二、儲存方法你了解多少

蛋白質的的儲存方法的挑選徹底在于蛋白質的可靠性以及儲存后何時再次使用你的蛋白質。

1、如即提即用的話,可將濃縮蛋白質存儲在單一溶液(如PBS),放置聚丙烯管或整潔的玻璃容器中,放到4°C冰箱儲存。

優勢:蛋白質非常容易得到,能夠迅速開展試驗,且同一管樣品可反復抽樣,那樣防止了因常常解除凍結而加快蛋白質的溶解。

缺陷:很有可能會遭遇微生物菌種污染,蛋白質失活和氧化,很有可能對試驗數據信息的均一性導致危害。要防止這類狀況,能夠把蛋白質分為大份存儲,并添加蛋白酶緩聚劑、抑菌劑和氧化劑等。但也需要依據自身蛋白質的狀況,假如你的蛋白質是詳細的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子結構內存有二硫鍵,為確保其一致性,應當儲存在氧化環境中。此外,存儲時間超出一個月的蛋白質能夠考慮到丟掉。

怎樣進行蛋白質保存??你了解多少?

2、分析到適合的緩沖溶液中能夠凍干,放4°儲存;也能加濃度較高的的硫酸銨(你的蛋白質不沉積的話),4°儲存。

留意:你需要留意添加硫酸銨后pH會降低一些,你的緩沖溶液可不可以太貼近蛋白質的等電點啊,蛋白質在等電點周邊沉積許多情況下是不能復溶,即便復溶活力也不可以確保。

3、提純后的蛋白質測濃度值后,添加50%凡士林,確定攪拌后分裝,液態氮冷凍,放進-20度或-80度儲存,特別是在適用抗氧化物。

優勢:在超低溫下,蛋白質對微生物菌種污染,蛋白酶溶解和氧化還原反應更有抵抗能力,非常容易確保其活力。用凡士林或乙二醇稀釋液使蛋白質處在溶液中,能夠便捷抽樣。除此之外,這類方法存儲的蛋白質能夠儲存長達一年,針對抗體軛合物是一個好的挑選。

缺陷:蛋白質在-20°溶液中仍有可能遭到水解反應、污染和氧化,假如蛋白質對氧化性環境規定較為高,也需添加緩聚劑、氧化劑等。并且將樣品儲放在50%冷凍保護膜中有時候是不可取的,在于你下面要做的試驗。

4、有一些蛋白質能夠不用凡士林,立即液態氮冷凍數分鐘,-80度儲存。

優勢:能夠長期性儲存(很多年),不用凡士林、疊氮化鈉等化合物,防止蛋白質溶解或微生物菌種污染。

缺陷:冷凍蛋白質應一次性使用,為了更好地防止不斷凍融循環產生溶解。除此之外,抗體軛合物(尤其是堿性磷酸酶一氧化氮合酶)冷凍后很有可能會降解。

5、長期性儲存蛋白質的另一個方法是凍干(lyophilization)。

優勢:蛋白質凍干后會展現膨松的白色粉末方式,處在徹底脫干的情況,能夠在冰箱中無期限儲存。

缺陷:針對一些蛋白質,凍干實際操作有一個潛在性難題便是蛋白質不可以復溶。凍干/復溶的全過程一樣會對蛋白質造成一定的損害功效。

三、這種關鍵你需要了解

1、確保穩定的pH值,一般PBS更為常見;

2、確保一定的蛋白質濃度值,假如濃度值較為稀的話,能夠考慮到加上一定量的BSA;

3、凡士林的加上也可以在非常大水平上提升抗體的可靠性;

4.為了更好地防腐能夠加上一定量的疊氮化鈉(辣根過氧化物酶偶聯反應的二抗一般不可以加),假如樣品要用以分子生物學檢驗,防止使用添加劑。

5、不論是冷凍或是存儲在溶液中,將蛋白質開展分裝,以防止凍融循環,減少污染的風險性。

6、開展蛋白質實際操作試驗時一定要帶手套,們的肌膚上面有一些蛋白酶,這種蛋白酶很可能會溶解掉大家的蛋白質樣品。肌膚上的別的化學分子也很有可能會污染蛋白質樣品。此外,為了更好地避免病菌的生長發育,蛋白質最好是儲存在殺菌的小管中。

7、防止不斷凍融循環或凍體力勞動融解全過程,那樣很可能會減少生物活性。

8、防止震蕩,震蕩造成的剪切力有可能會對蛋白質造成毀壞功效。震蕩時溶液中會造成氣泡,O2的進到會造成蛋白質處于氧化環境中。蛋白質中帶有半胱氨酸,其非常容易被氧化為胱氨酸,這一全過程很可能會破環蛋白質的活力。

 

 寫到最后:

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